Барыгина В.В., Миронова А.А., Зацепина О.В.
В журнале Цитология
Год: 2012 Том: 54 Номер: 1 Страницы: 17–24
Метод FRAP (fluorescence recovery after photobleaching) в сочетании с конфокальной лазерной сканирующей микроскопией является одним из основных подходов к изучению свойств белков в живых клетках млекопитающих. Однако данные разных авторов о динамическом состоянии одного и того же белка даже в клетках одного типа могут сильно различаться. Причины таких расхождений до сих пор специально не анализировались. В настоящей работе на примере белка ядрышка фибрилларина, слитого с EGFP, изучено влияние площади облучаемой области (region of interest, ROI) и температурных условий проведения эксперимента на основные динамические характеристики белка - долю мобильной фракции и время полувосстановления флуоресценции (t1/2) после фотообесцвечивания. Полученные результаты показали, что оба параметра заметно влияют на оценку подвижности фибрилларина-EGFP в клетках HeLa. Сделано заключение о том, что при постановке экспериментов методом FRAP площадь ROI должна быть стандартизирована и по возможности минимизирована. Кроме того, при анализе динамических характеристик белков ядрышка, участвующих в температурозависимых энзиматических реакциях, необходимо придерживаться стандартных температурных условий.
